Kit ta' Assay ta' Fluworexxenza ta' Qtar Lipidi

 

Isem tal-Prodott	Cat. Nru.	Speċ.
Kit ta' Assay ta' Fluworexxenza ta' Qtar Lipidi	G1905-100T	100 T

 

 

Il-qtar tal-lipidi huma organelli speċjalizzati tal-ħażna tal-lipidi fiċ-ċelloli, li jistgħu jirregolaw il-ħażna u l-idroliżi tal-lipidi newtrali fiċ-ċelloli u jipprovdu bilanċ dinamiku tal-enerġija għaċ-ċelloli. Barra minn hekk, il-qtar tal-lipidi jistgħu jimxu tul iċ-ċitoskeletru u jinteraġixxu ma 'organelli oħra, u għandhom rwol importanti fir-regolazzjoni tat-trasduzzjoni tas-sinjali. Akkumulazzjoni anormali ta 'qtar ta' lipidi ċellulari sseħħ f'diversi tipi ta 'mard metaboliku, bħall-obeżità, fwied xaħmi, mard kardjovaskulari, u stati patoloġiċi.

Lipid Droplet Fluorescence Assay Kit huwa bbażat fuq BODIPY 493/503, li hija sonda fluworexxenti lipofilika li kapaċi tinlokalizza għal lipidi polari, u tista 'tintuża biex tikkalibra l-kontenut newtrali ta' lipidi taċ-ċelloli u t-tessuti. Dan il-kit ġie ottimizzat u debugged minn tagħna. Tim ta 'R&D, u għandu vantaġġi multipli bħal faċli biex tużah, prestazzjoni stabbli u riproduċibbiltà tajba, eċċ. Aktar ma jkun għoli l-intraċellulari kontenut ta 'lipidi, aktar b'saħħitha tkun l-intensità tal-fluworexxenza ġġenerata, li tista' tiġi skoperta minn mikroskopju tal-fluworexxenza u ċitometru tal-fluss. Barra minn hekk, dan il-kit jipprovdi wkoll aċidu olejku bħala induttur tas-sintesi u l-ħażna tat-trigliċeridi, li jista 'jintuża għal induzzjoni ta' kontroll pożittiv.

 

 

Vapur bis-silġ niexef; Aħżen fi -20 grad 'il bogħod mid-dawl għal 6 xhur.

 

 

Numru tal-Komponent	Komponent	G1904-100T
G1905-1	Sonda tal-assaġġ tal-qtar tal-lipidi (2 mM)	100 μL
G1905-2	Lipid Droplet Assay Buffer	100 mL
G1905-3	Induttur pożittiv (500 mM)	50 μL
Manwal		1 pc

 

Nota: Il-ħinijiet ta' reazzjoni ta' hawn fuq huma ttestjati għal 6-sistema ta' pjanċa tal-bir.

 

 

Nota: Ħu 6-ċelluli li jwaħħlu l-pjanċa sew bħala eżempju, iċ-ċelloli tas-sospensjoni jeħtieġ li jiġu ċentrifugati kull darba li l-likwidu jinbidel; Il-kampjuni tat-tessut jirreferu direttament għall-passi tat-tbajja 'u l-ittikkettar, u l-volum ġenerali tar-reaġenti użati huwa aġġustat skont is-sitwazzjoni; Jekk meħtieġ, il-kampjuni jistgħu jiġu ffissati bil-quddiem, iżda jekk jogħġbok evita t-perforazzjoni tal-kampjuni.

1. Preparazzjoni ta 'soluzzjoni ta' ħidma għall-assaġġ ta 'qtar tal-lipidi u soluzzjoni ta' ħidma għall-induzzjoni ta 'qtar tal-lipidi:

1.1. Ħu ammont xieraq ta 'sonda tal-assaġġ tal-qtar tal-lipidi (2 mM) u buffer tal-assaġġ tal-qtar tal-lipidi, ħallat sewwa fi proporzjon ta' 1: 500-2000, u pprepara soluzzjoni ta' ħidma għall-assaġġ tal-qtar tal-lipidi;

1.2. Ħu ammont xieraq ta 'induttur pożittiv (500 mM) u uża l-mezz tal-kultura taċ-ċelluli taċ-ċelloli tat-test korrispondenti biex iddilwah għal 400-1000 uM, u pprepara soluzzjoni ta' ħidma ta 'induzzjoni ta' qtar tal-lipidi għal użu żejda (din il-konċentrazzjoni hija referenza firxa, u jistgħu jiġu aġġustati kif xieraq skond in-natura taċ-ċelloli jew ċirkostanzi oħra).

2. Grupp ta 'kontroll pożittiv u trattamenti tad-droga u oħrajn (6-ċelluli li jwaħħlu l-pjanċa sew, pereżempju, ċelluli ta' sospensjoni kull darba li tbiddel il-likwidu, jekk jogħġbok wettaq ċentrifugazzjoni):

2.1. Iċ-ċelloli jitħawlu minn qabel fi 6-pjanċi tal-bir kif meħtieġ (bi jew mingħajr crawler skont l-assaġġ u t-tagħmir);

2.2. Neħħi l-medium oriġinali tal-kultura taċ-ċelluli u aħsel darbtejn b'PBS jew buffers oħra;

2.2.1. Grupp sperimentali: iċ-ċelloli li għandhom jiġu ttestjati huma soġġetti għal stimulazzjoni tad-droga jew trattamenti rilevanti oħra, u l-ħin ta 'inkubazzjoni mixtieq huwa stabbilit minnek innifsek;

2.2.2. Grupp ta 'kontroll pożittiv: 1 mL ta' soluzzjoni tax-xogħol ta 'induzzjoni ta' qtar tal-lipidi huwa miżjud mal-pjanċa tal-bir, li titqiegħed f'inkubatur għal inkubazzjoni matul il-lejl;

2.3. Fi tmiem l-inkubazzjoni, dawwar għall-pass 3 għat-tikkettar tat-tebgħa.

3. Marker tat-tbajja tal-qtar tal-lipidi:

3.1. Neħħi l-medium cellogenic u aħsel 2-3 darbiet b'PBS jew buffers oħra;

3.2. Neħħi l-wash buffer, żid 1 mL ta 'Lipid Droplet Assay Working Solution u ħawwad bi tħawwad ġentili;

3.3. Inkuba għal 15-il minuta f'inkubatur tas-CO2 protett mid-dawl;

3.4. Wara l-inkubazzjoni, aħselha darbtejn b'PBS jew buffers oħra, u tista 'tiġi mtebba aktar b'nuklei u operazzjonijiet oħra jew skoperta bit-tagħmir xieraq skont il-ħtiġijiet sperimentali;

4. Sejbien ta' qtar tal-lipidi:

4.1. Il-kampjun wara l-inkubazzjoni u maħsul fi 3.4 huwa analizzat bl-użu tal-metodu u l-istrumentazzjoni xierqa, ttikkettjati biex juru fluworexxenza ħadra, EX/EM 493/503 nm, u xi eżempji ta 'skoperta strumentali huma mogħtija hawn taħt;

4.1.1. Direttament jew b'soluzzjoni tas-siġillar tat-tifi kontra l-fluworexxenza (Oġġett Nru G1401), il-film huwa ssiġillat u mbagħad imqiegħed taħt mikroskopju fluworexxenti għal skoperta u analiżi.

4.1.2. Wara d-diġestjoni u s-sospensjoni mill-ġdid bl-użu ta’ tryptic digest (ċelluli ta’ sospensjoni ma jintużawx), iċ-ċelloli jiġu skoperti u analizzati bl-użu taċ-ċitometrija tal-fluss.

 

 

1. Minħabba t-tipi u l-proprjetajiet differenti taċ-ċelloli, il-konċentrazzjoni ta 'indutturi u sondi pożittivi u l-ħin ta' inkubazzjoni jistgħu jiġu aġġustati b'mod xieraq skont il-ħtiġijiet tal-esperiment.

2. Il-kampjuni għandhom jevitaw kuntatt ma 'solventi organiċi jew komponenti oħra li jaffettwaw il-lipidi biex jevitaw li jinterferixxu mal-eżattezza tal-assaġġ.

3. Iż-żebgħat fluworexxenti huma soġġetti għat-tifi, u l-proċess għandu jkun protett mid-dawl.

4. Għas-saħħa u s-sigurtà tiegħek, jekk jogħġbok ilbes kowt tal-laboratorju u ingwanti waqt it-tħaddim.

 

Għal Użu ta' Riċerka Biss!

 

 

It-tags Popolari: kit tal-assaġġ tal-fluworexxenza tal-qtar tal-lipidi, manifatturi tal-kit tal-assaġġ tal-fluworexxenza tal-qtar tal-lipidi taċ-Ċina, fornituri, fabbrika