Mono-Lumi Firefly Luciferase Reporter Ġene Analiżi Kit

 

Isem tal-Prodott	Cat. Nru.	Speċ.
Mono-Lumi Firefly Luciferase Reporter Ġene Analiżi Kit	G1702-100T	100T

 

 

Is-sistema firefly-luciferase tintuża l-aktar għall-iskoperta tal-ġeni reporter. L-elementi regolatorji tat-traskrizzjoni tal-ġene fil-mira ġew ikklonati upstream u downstream tal-luċiferażi biex jinbena plasmid tal-ġene reporter. Il-plasmid imbagħad ġie trasfettat fiċ-ċelloli, u wara li ttrattat iċ-ċelloli trasfettati b'mediċini jew stimuli oħra, iċ-ċelloli nġabru u ġew lisati, u l-attività tal-luċiferażi fil-lisat ġiet imkejla. Ir-regolazzjoni tat-traskrizzjoni tal-ġeni fil-mira minn stimuli eżoġeni bħal mediċini hija determinata mill-attività tal-luċiferażi.

Il-Kit tal-Assaġġ tal-Ġene Reporter Mono-Lumi Firefly Luciferase għandu sensittività għolja, firxa wiesgħa ta 'skoperta u sinjal ta' fluworexxenza stabbli. Bl-użu Firefly Luciferase, li jikkatalizza l-ossidazzjoni tas-sottostrat luciferin firefly (luciferin) biex jiġġenera oxyluciferin taħt il-kundizzjonijiet ta 'Mg2+, ATP, O2, eċċ u jiġġenera bijofluworexxenza fil-proċess, il-prinċipju ta' attività Firefly Luciferase jista 'jkun misjuba malajr.

 

 

Vapur bis-silġ niexef; aħżen fi -80 grad protett mid-dawl, validu għal mill-inqas sena; aħżen fi -20 grad protett mid-dawl, sa 6 xhur.

 

 

Numru tal-Komponent	Komponent	G1702-100T
G1702-1	Buffer tal-Liżi taċ-Ċelloli	50 mL
G1702-2	Substrat ta' Reazzjoni tal-Luċiferażi (50×)	200 μL
G1702-3	Buffer ta' Reazzjoni Luciferase	10 mL
Manwal		Kopja waħda

 

 

1. Preparazzjoni ta 'soluzzjoni ta' ħidma ta 'reazzjoni ta' luciferase 1 × firefly

1.1 Ħoll kull komponent tal-kit f'temperatura tal-kamra u ħallat rasu 'l isfel biex tiżgura xoljiment sħiħ. Is-Sustrat ta 'Reazzjoni Luciferase (50×) għandu jiġi mdewweb fuq is-silġ u ċentrifugat fil-qosor biex jiġi żgurat li r-reaġent jegħreq fil-qiegħ tat-tubu;

1.2 Is-Sustrat ta' Reazzjoni Luciferase (50×) ġie dilwit 50 darba b'Luciferase Reaction Buffer, jiġifieri, 10 μL Luciferase Reaction Substrat (50×) + 490 μL Luciferase Reaction Buffer tħallat sew biex tikseb 500 μL ta' 1× Firefly Luciferase Buffer ta' Reazzjoni.

2. Pretrattament taċ-ċelluli u liżi

2.1 Ċelloli tal-pjanċa/bir fi pjanċi tal-bir xierqa, wettaq trasfezzjoni taċ-ċelluli jew trattament minn qabel rilevanti ieħor skont ir-rekwiżit sperimentali.

2.2 Għal ċelloli aderenti: Wara li tneħħi l-medju oriġinali tal-kultura taċ-ċelluli, żid ammont xieraq ta 'Cell Lysis Buffer ma' kull bir skond it-tabella hawn taħt.

Għaċ-ċelloli tas-sospensjoni: Wara ċ-ċentrifuga, neħħi s-supernatant u żid ammont xieraq ta' Cell Lysis Buffer maċ-ċelloli preċipitati

Irreferi għat - tabella hawn taħt għall - ammont ta ' lysis buffer issuġġerit .

 

Kultura taċ-Ċelloli tajjeb-Plate	Buffer/Well tal-Liżi taċ-Ċelloli
6-tajjeb	500 μL
12-tajjeb	300 μL
24-tajjeb	200 μL
48-tajjeb	150 μL
96-tajjeb	100 μL

 

2.3 Ċelloli tal-liżi kompletament f'temperatura tal-kamra għal 10-20 min, iġbor iċ-ċelloli f'tubu ċentrifugu ta' 1.5mL b'ċentrifuga fi 12,000 × g f'4 gradi għal 10 min, żomm is-supernatant (lisat taċ-ċelluli) għal użu aktar tard.

3. Assaġġ luciferase Firefly

3.1 Soluzzjoni ta 'ħidma ta' reazzjoni ta 'luċiferażi 1 × firefly ippreparata minn qabel ġiet ekwilibrata għat-temperatura tal-kamra u miżjuda ma' pjanċa 96- abjad opak f'100 μL/bir;

3.2 Is-supernatant tal-liżi taċ-ċelluli mill-pass 2 ġie miżjud mal-pjanċa tal-bir ta 'hawn fuq 96- f'20 μL/bir;

3.3 Ħawwad orizzontalment għall-omoġeneità u immedjatament wettaq analiżi tal-kemiluminixxenza billi tuża miter tal-luminometru tal-luminometru, tikkettar tal-enzimi multifunzjonali b'modulu ta 'detezzjoni tal-kimiluminixxenza, jew strument ieħor li kapaċi jikxef il-bijoluminixxenza.

 

 

1. Qabel l-assaġġ, is-Soluzzjoni tax-Xogħol ta 'Reazzjoni ta' Firefly Luciferase 1x ippreparata minn qabel jeħtieġ li tinġieb lura għat-temperatura tal-kamra qabel l-użu.

2. Luciferase Reaction Buffer jista' jippreċipita wara li jinħall. Jekk jogħġbok ħawwad sewwa qabel l-użu biex tiżgura xoljiment sħiħ.

3. Is-soluzzjoni tax-xogħol ta 'reazzjoni ta' 1 × luciferase hija suxxettibbli li tiġi ossidizzata. Għal sejbien ta 'ħafna kampjuni, iż-żieda ta' soluzzjoni ta 'ħidma ta' reazzjoni luciferase 1 × firefly għandha tiġi kkontrollata fi żmien qasir. Huwa rakkomandat li żżid kampjuni bil-pipetti b'ħafna kanali, u żżomm il-volum ta 'kull bir huwa konsistenti.

4. Biex tevita interferenza bejn il-bjar, huwa rakkomandat li tuża pjanċa tal-bir abjad u opak. Il-pjanċa sewda sewda u opaka tista 'tintuża wkoll, iżda se tassorbi s-sinjal tal-fluworexxenza, tnaqqas is-sinjal tal-fluworexxenza ta' skoperta.

5. Għas-sigurtà u s-saħħa tiegħek, jekk jogħġbok ilbes nuċċalijiet tas-sigurtà, ingwanti jew ilbies protettiv.

 

Għal Użu ta' Riċerka Biss!

 

 

 

It-tags Popolari: mono-lumi firefly luciferase reporter ġene assay kit, iċ-Ċina mono-lumi firefly luciferase reporter gene assay kit manifatturi, fornituri, fabbrika