Reaġent tat-Trasfezzjoni PEI 40K

PEI 40K Transfection Reagent (reaġent tat-trasfezzjoni tal-polyethyleneimine linearizzat) huwa polimeru katjoniku ċċarġjat ħafna b'piż molekulari ta '40,000 ibbażat fuq polyethyleneimine linearizzat, li huwa ċċarġjat b'mod pożittiv u jista' jorbot b'mod effettiv aċidi nuklejċi ċċarġjati b'mod negattiv biex jiffurmaw kumpless b' minnhom u jintroduċuhom fiċ-ċelloli, u huwa adattat għat-trasfezzjoni tad-DNA tal-plasmid fiċ-ċelloli. Ir-reaġent tat-trasfezzjoni PEI 40K (polyethyleneimine linearizzat) għandu ċitotossiċità baxxa, effiċjenza ta 'trasfezzjoni għolja u prezz baxx, li jagħmilha kost-effettiva ħafna meta mqabbla mar-reaġenti tat-trasfezzjoni bbażati fuq il-liposomi. Ġie vvalidat li r-reaġent ta' trasfezzjoni lineari PEI 40K jintuża ħafna f'varjetà ta' linji taċ-ċelluli inklużi HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ Ċelloli 3T3, Sf9, HepG2, u Hela, eċċ., B'effiċjenzi ta 'trasfezzjoni għoljin daqs 80% ~ 90%. Il-konċentrazzjoni ta 'PEI 40K, il-komponent ewlieni ta' dan il-prodott, hija 1 mg/mL.

Vapur bis-silġ imxarrab; Aħżen fi -20 grad , validu għal 6 xhur. Jew aħżen f'4 gradi, validu għal 3 xhur.

1. Tħejjija qabel it-trasfezzjoni taċ-ċelloli aderenti (6-pjanċa tal-bir, tabella ta' referenza għal speċifikazzjonijiet oħra):

A) Il-ġurnata qabel it-trasfezzjoni, iċ-ċelloli kienu xierqa biex jitħawlu b'mod uniformi fil-pjanċi tal-pori f'an

densità xierqa biex tikkonverġi għal 70 – 85% mat-trasfezzjoni formali;

B) Qabel it-trasfezzjoni, il-midja taċ-ċelluli primarji tneħħiet u maħsula 1-2 darbiet b'PBS qabel ma ssostitwixxa 1.8 mL ta 'medja bażi mingħajr serum jew serum baxx (taħt il-5%), jew Opti-MEM; ċelluli differenti kellhom dipendenza tas-serum differenti skond it-tip ta 'ċellula speċifika;

C) Iċ-ċelloli apped tpoġġew fl-inkubatur u nbdiet il-preparazzjoni tal-kumplessi tat-trasfezzjoni.

2. Iċ-ċelloli tas-sospensjoni ġew ippreparati qabel it-trasfezzjoni:

A) Fil-jum tat-trasfezzjoni, ammont xieraq ta 'ċelloli ġew ċentrifugati biex jitneħħa l-mezz

u sospiż mill-ġdid b'medja bażali mingħajr serum jew serum baxx (taħt il-5%);

B) Iċ-ċelloli tas-sospensjoni ppreparati tqiegħdu fl-inkubatur u bdew il-preparazzjoni ta '

kumplessi ta 'trasfezzjoni, u l-proporzjon tal-volum bejn kumplessi ta' trasfezzjoni u medju jista '

issir b'referenza għal ċelloli aderenti għal aġġustamenti xierqa.

3. Ġew ippreparati kumplessi ta 'trasfezzjoni:

A) Likwidu ta’ preparazzjoni A: 100 μL ta’ medju ta’ bażi ħieles mis-serum u 2 ug ta’ DNA plasmid, nfiħ u

imħallat;

B) Tħejjija tal-likwidu B: 100 L ta 'medja bażi mingħajr serum u 6-8 μL PEI 40 K Trasfezzjoni

Reaġent, nfiħ u taħlit;

C) Soluzzjoni B ġiet miżjuda mal-likwidu A, minfuħa bil-mod u mħallta, u inkubata f'temperatura tal-kamra għal

15-il minuta biex tifforma kumpless ta' trasfezzjoni tad-DNA-PEI.

4. Ċelloli trasfettati:

A) Żid il-kumpless tat-trasfezzjoni miksuba fil-pass preċedenti mal-pjanċa tat-toqba mibdula qabel permezz

qsim jew madwar is-soluzzjoni;

B) Ħawwad il-pjanċa "8" jew mod ieħor biex titħallat kompletament u inkubat f'inkubatur ta' 37 grad, 5% CO2;

C) Il-kumplessi tat-trasfezzjoni tad-DNA-PEI maċ-ċelloli għal 4 – 6 sigħat urew effiċjenza aħjar tat-trasfezzjoni,

estensjoni xierqa jew inkubazzjoni matul il-lejl u effiċjenza aħjar tat-trasfezzjoni.

1. Jekk jogħġbok uża ċelloli b'saħħithom f'kondizzjoni tajba u ċelloli rkuprati huma rakkomandati li jgħaddu mill-inqas 2 darbiet qabel it-trasfezzjoni.

2. Jekk jogħġbok uża DNA plasmid ta' kwalità għolja, mingħajr endotossini.

3. Għall-użu inizjali, huwa rakkomandat li l-prodott jiġi mqassam biex jiġi evitat iffriżar u tidwib ripetut.

4. Konċentrazzjonijiet għoljin ta 'serum fit-trasfezzjoni, kif ukoll l-użu ta' antibijotiċi, jistgħu jaffettwaw l-istatus taċ-ċelluli kif ukoll l-effiċjenza tat-trasfezzjoni.

5. It-tolleranza taċ-ċelluli differenti, is-sensittività, it-tul tal-ħin ta 'inkubazzjoni tat-trasfezzjoni, u l-proporzjon ta' użu PEI / DNA ġew aġġustati kif xieraq.

6. Jekk jogħġbok ilbes ilbiesi sperimentali u ingwanti li jintremew meta topera.

Skeda: Użu ta' trasfezzjoni f'kontenituri differenti tal-kultura taċ-ċelluli (għal referenza biss)

Għal Użu ta' Riċerka Biss!

It-tags Popolari: reaġent tat-trasfezzjoni pei 40k, iċ-Ċina pei 40k reaġent tat-trasfezzjoni manifatturi, fornituri, fabbrika