Introduzzjoni tal-Prodott
|
Isem tal-Prodott |
Cat. Nru. |
Speċ. |
|
Kit ta' Sinteżi ta' cDNA tal-Ewwel Strand tal-miRNA (Reazzjoni ta' Denbu) |
G3334-25 |
25 rxns |
Deskrizzjoni tal-Prodott/Introduzzjoni
MiRNA First Strand cDNA Synthesis Kit (Tailing Reaction) fih ir-reaġenti kollha meħtieġa għas-sintesi tal-cDNA tal-ewwel strand miRNA. Il-kit juża RNA totali jew miRNA bħala mudell, u r-reazzjoni ta 'denb tal-Poly (A) Polymerase u r-reazzjoni ta' traskrizzjoni inversa huma sinkronizzati biex jissintetizzaw diversi cDNAs tal-ewwel strand miRNA b'effiċjenza għolja. Il-kit jipprovdi wkoll U6 Forward Primer u Universal Reverse Primer għal amplifikazzjoni sussegwenti (applikabbli għal kampjuni tal-bniedem, tal-firien u tal-ġurdien), u l-prodott sintetizzat ta 'cDNA single-stranded jeħtieġ biss li jkun iddisinjat b' primer PCR forward għal PCR jew qPCR sussegwenti.
Kundizzjonijiet ta' Ħażna u Tbaħħir
Vapur bis-silġ imxarrab; Aħżen fi -20 grad , validu għal 12-il xahar.
Kontenut tal-Prodott
|
Numru tal-Komponent |
Komponent |
G3334-25 |
|
G3334-1 |
miRNA RT Enzima Mixa |
25 μL |
|
G3334-2 |
5 × Reazzjoni Bufferb |
100 μL |
|
G3334-3 |
U6 Quddiem PCR Primer (10 μM) |
100 μL |
|
G3334-4 |
Universali Reverse PCR Primer (10 μM) |
100 μL |
|
G3334-5 |
Ilma Ħieles mill-Nukleażi |
1 mL |
|
Manwal |
Kopja waħda |
|
a:with RNase Inhibitor u Poly(A) Polymerase.
b:b'primers ta' traskrizzjoni inversa, Taħlita dNTP, ATP u Mg²+.
Protokoll / Proċeduri tal-Assaġġi
1. Tħejjija ta 'sistema ta' reazzjoni rakkomandata (Preparazzjoni ta 'sistema ta' reazzjoni rakkomandata fuq is-silġ)
|
Komponent |
Volum |
|
5 × Buffer ta 'Reazzjoni |
4 μL |
|
MiRNA RT Taħlita ta' Enżimi |
1 μL |
|
RNA totali/miRNAa |
x μL |
|
Ilma Ħieles mill-Nukleażi |
Żid ma 20 μL |
a: l-RNA totali rakkomandat huwa 2 ug (mhux aktar minn 5 ug), u l-miRNA rakkomandat huwa 200 ng.
2. Ħallat bil-mod u ċentrifuga.
3. Wettaq poly(A) polimerizza u reverse traskrizzjoni billi tuża l-kundizzjonijiet termali rakkomandati hawn taħt:
|
Temperatura |
Ħin |
|
37 grad |
60 min |
|
85 grad |
5 sek |
4. Is-soluzzjoni ta' reazzjoni ta' cDNA miksuba hija rakkomandata għad-dilwizzjoni tal-gradjent qabel ma tintuża bħala mudell għal PCR kwantitattiv ta' fluworexxenza sussegwenti.
Nota
1. Ingħatat attenzjoni biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni ta 'RNase waqt l-operazzjoni.
2. Il-prodotti tat-traskrizzjoni inversa jistgħu jinħażnu fi grad -20 għal perjodu qasir. Jekk tkun meħtieġa ħażna fit-tul, huwa rakkomandat li taħżen fi grad -80 wara l-ippakkjar u tevita ċikli ripetuti ta' ffriżar u tidwib.
3. Il-kit fih primers downstream universali għal PCR kwantitattiv, u l-primers upstream huma primers speċifiċi għall-miRNA, iddisinjati skont il-miRNA fil-mira, u b'mod ġenerali l-primers upstream huma s-sekwenzi miRNA fil-mira li jibdlu U għal T.
Għal Użu ta' Riċerka Biss!
It-tags Popolari: mirna first strand cdna synthesis kit(tailing reaction), iċ-Ċina mirna first strand cdna synthesis kit(tailing reaction) manifatturi, fornituri, fabbrika
