MethylGold DNA Bisulfite Konverżjoni Kit

L-epiġenetika hija fergħa tal-ġenetika li tistudja l-bidliet li jintirtu fl-espressjoni u r-regolamentazzjoni tal-ġeni mingħajr ma tbiddel is-sekwenza tan-nukleotidi tal-ġeni. Fosthom, il-metilazzjoni tad-DNA hija l-aktar waħda skoperta bikrija u waħda mill-mekkaniżmi ta 'regolazzjoni epiġenetika l-aktar studjati fil-fond.

Ir-reazzjoni ta 'konverżjoni tal-bisulfite hija teknika komuni biex tistudja l-mudell tal-metilazzjoni tad-DNA ġenomika. Il-prodott jgħaqqad ir-reazzjoni ta 'konverżjoni tal-bisulfite ma' teknoloġija ġdida tal-membrana tal-ġel tas-silika biex tikkonverti cytosine mhux methylated għal uracil, filwaqt li cytosine methylated tibqa 'mhux mibdula, u l-effiċjenza tal-konverżjoni tista' tilħaq aktar minn 99%. Id-DNA trasformat jista 'jintuża f'esperimenti analitiċi downstream, inkluż amplifikazzjoni tal-PCR, diġestjoni ta' endonuclease ta 'restrizzjoni, sekwenzar, microarray, eċċ.

Buffer BP jintbagħat bis-silġ imxarrab u jinħażen fi -20 grad . Reaġenti oħra jintbagħtu u jinħażnu f'temperatura tal-kamra; validu għal 12-il xahar.

1. Żid 280 μL Buffer BM, 350 μL BP u 560 μL Ilma mingħajr Nukleażi għal Reaġent ta' Konverżjoni CT qabel l-użu, imbagħad vortex biex jinħall u maħżun fi grad -20 .

2. Jekk jogħġbok żid 12 mL isopropanol ma' Buffer GB qabel l-użu, ħawwad sew u uża.

3. Jekk jogħġbok żid 24 mL etanol anidru ma Buffer DB qabel l-użu, żid 80 mL alkoħol anidru ma Buffer PW, ħawwad sew u uża.

1. Bilanċ tal-kolonna: Poġġi l-Kolonna Spin tad-DNA fit-Tubu tal-Ġbir, żid 500 μL Buffer BL. Iċċentrifuga fi 12,000 rpm għal 1 min, armi l-filtrat fit-Tube tal-Ġbir, u poġġi l-Kolonni tad-DNA Spin lura fit-Tubu tal-Ġbir (il-Kolonna tal-Ispin tad-DNA ttrattata tintuża l-aħjar fl-istess jum).

2. Ipprepara s-sistema ta 'konverżjoni tal-bisulfite f'tubu ċentrifugu ta' 200 μL: Ittrasferixxi 20 μL DNA ġenomika f'tubu ċentrifugali (l-ammont totali huwa 500 ~ 2000 ng, jekk inqas minn 20 μL jistgħu jiġu supplimentati b'Ilma ħieles minn Nukleażi), żid 130 Reaġent ta' Konverżjoni μL CT, u ħallat bil-mod b'pipetta.

3. Ittrasferixxi t-taħlita għall-istrument taċ-ċiklu termali, inkuba fi 98 grad għal 10 min, 64 grad għal 2.5 sigħat u aħżen f'4 gradi (mhux obbligatorju).

4. Wara t-tmiem tar-reazzjoni, ċentrifuga fil-qosor, iġbor is-soluzzjoni tal-ħajt fil-qiegħ tal-pajp, ittrasferixxi s-soluzzjoni ta 'reazzjoni għat-tubu taċ-ċentrifuga ta' 1.5 mL.

5. Żid 600 μL Buffer GB (ikkonferma jekk iżidx isopropanol) u ħawwad sew b'pipetta.

6. Ittrasferixxi s-soluzzjoni miksuba fil-pass preċedenti għal DNA Spin Column, ċentrifuga fi 12,000 rpm għal 1 min, armi l-filtrat fit-Tube tal-Ġbir, u poġġi l-Kolonni tad-DNA Spin fit-Tubu tal-Ġbir.

7. Żid 600 μL Buffer PW mal-Kolonna Spin tad-DNA (ikkonferma jekk iżżidx etanol anidruż jew le). Iċċentrifuga fi 12,000 rpm għal 1 min, armi l-filtrat fit-Tube tal-Ġbir, u poġġi l-Kolonni tad-DNA Spin fit-Tubu tal-Ġbir.

8. Żid 600 μL Buffer DB mad-DNA Spin Column (ikkonferma jekk iżżidx etanol anidruż jew le). Poġġi f'temperatura tal-kamra għal 15-il minuta, ċentrifuga fi 12,000 rpm għal 1 min, armi l-filtrat fit-Tube tal-Ġbir, u poġġi l-Kolonni tad-DNA Spin fit-Tubu tal-Ġbir.

9. Żid 600 μL Buffer PW mad-DNA Spin Column (jekk jogħġbok żid Buffer PW tul il-ħajt tal-pajp biex tgħin tlaħlaħ il-melħ residwu fuq il-ħajt tal-pajp). Iċċentrifuga fi 12,000 rpm għal 1 min, armi l-filtrat fit-Tube tal-Ġbir, u poġġi l-Kolonni tad-DNA Spin fit-Tubu tal-Ġbir.

10. Irrepeti l-pass 9.

11. Iċċentrifuga fi 12,000 rpm għal 2 min, poġġi DNA Spin Column f'tubu ċentrifugu ġdid ta' 1.5 mL.

12. Iftaħ l-għatu tat-tubu taċ-ċentrifuga, ħallih f'temperatura tal-kamra għal 5 ~ 10 min biex volatilizza kompletament l-etanol.

13. Żid 20 μL Ilma mingħajr Nukleażi mal-Kolonna tad-DNA Spin, wieqfa f'temperatura ambjentali għal 2 min.

14. Iċċentrifuga fi 12,000 rpm għal 2 min, id-DNA trasformat jista 'jinkiseb.

1. Jekk jogħġbok aqra bir-reqqa l-Manwal tal-Prodott qabel l-użu.

2. Iż-żieda ta 'Buffer BL fil-pass tal-bilanċ tal-kolonna tista' ttejjeb il-kapaċità tal-adsorbiment tal-kolonna tal-adsorbiment, ittejjeb l-uniformità u l-istabbiltà tal-kolonna tal-adsorbiment, u telimina l-influwenza ta 'temperatura għolja, umdità jew fatturi ambjentali avversi oħra fuq il-kolonna tal-adsorbiment. .

3. Il-ħin tal-ipproċessar ta 'Buffer DB m'għandux ikun twil wisq, huwa faċli li tikkawża frammentazzjoni eċċessiva tad-DNA u taffettwa l-esperimenti ta' segwitu.

4. Jekk id-DNA riċiklat jintuża fl-istess jum, jekk jogħġbok żommu f'2 ~ 8 gradi. Jekk ma tistax tużah fil-ħin, jekk jogħġbok żommha fi -20 grad .

5. Fir-reazzjoni ta 'amplifikazzjoni PCR sussegwenti, huwa ssuġġerit li prodotti 2 ~ 3 μL għandhom jiżdiedu bħala mudelli fis-sistema ta' 20 μL.

6. Għas-sigurtà u s-saħħa tiegħek, jekk jogħġbok ilbes kowt tal-laboratorju u ingwanti li jintremew.

Għal Użu ta' Riċerka Biss!

It-tags Popolari: methylgold dna bisulfite konverżjoni kit, iċ-Ċina methylgold dna bisulfite konverżjoni kit manifatturi, fornituri, fabbrika