Kif tgħid il-qal, "Dettalji jiddeterminaw is-suċċess jew il-falliment."Kultant, ħiliet żgħar fl-esperimenti jistgħu jagħmlu differenza kbira.
Marker tal-proteina: Kompost minn proteini ta 'purità għolja b'piżijiet molekulari magħrufa, iservi bħala "ħakkiem" biex jindika l-piż molekulari tal-proteina fil-mira, u jista' juri wkoll jekk it-trasferiment tal-membrana jirnexxi u l-firxa ta 'l-elettroforeżi tal-proteina fuq il-ġel. L-għażla tal-markatur tal-proteina t-tajba hija wkoll waħda mill-kundizzjonijiet meħtieġa għas-suċċess tal-esperimenti tal-Western blot (WB).
I. Bħalissa, il-markaturi jistgħu jinqasmu bejn wieħed u ieħor fi tliet tipi:
1.
2. Marker prestaned: Dawn fihom żebgħa u proteina, li jagħmluhom viżibbli għall-għajn. Tista 'tosserva direttament il-progress ta' l-elettroforeżi u tivverifika jekk it-trasferiment tal-membrana huwiex komplut, li jagħmilhom pjuttost komunement użati. Kull faxxa tal-markatur hija konjugata ma 'żebgħa, li tippermetti monitoraġġ f'ħin reali ta' elettroforeżi u trasferiment tal-membrana, kif ukoll lokalizzazzjoni affidabbli tal-proteina fil-mira. Innota li l-piż molekulari ta 'markaturi mtebba' minn qabel jista 'jkun differenti mill-piż molekulari attwali tagħhom.
3 Dan jippermetti li l-markatur tal-proteina jidher fuq il-membrana flimkien mal-medda tal-proteina fil-mira. Normalment, żewġ faxex imtebba 'minn qabel huma inklużi għall-osservazzjoni f'ħin reali ta' l-elettroforeżi u l-progress tat-trasferiment tal-membrana, u biex tevalwa l-effiċjenza u d-direzzjoni tat-trasferiment.
II. Kif tagħżel markatur tal-proteina?
L-ewwelnett, iċċara l-iskop sperimentali. Jekk għandek bżonn biss li tosserva d-daqs tal-meded tal-proteina wara l-elettroforeżi, tikseb piżijiet molekulari tal-proteina preċiżi, jew tiddistingwi bejn meded ta 'daqs mill-qrib, jista' jintuża markatur tal-proteina mhux stined. Jekk twettaq esperiment WB, markatur tal-proteina prestained jista 'jintgħażel biex josserva l-elettroforeżi u t-trasferiment tal-membrana f'ħin reali.
Hawn huma xi fatturi li għandek tikkonsidra meta tagħżel markatur tal-proteina xierqa:
1. Firxa ta 'piż molekulari: Il-markaturi tal-proteini huma kklassifikati f'firxiet ta' piż molekulari għoljin, baxxi u wiesgħa. Markers tal-piż molekulari għoljin huma komunement użati għall-iskoperta ta 'proteini kbar, filwaqt li markaturi ta' piż molekulari baxx jintużaw għal proteini jew peptidi iżgħar. Jekk għandek bżonn flessibilità mal-laboratorju tiegħek, l-għażla ta 'markatur ta' piż molekulari wiesa 'bi faxex imqassma b'mod uniformi jista' jgħinek tidentifika proteini fi kwalunkwe firxa ta 'piż molekulari.
2. Eżattezza tal-medda: ServiceBio Markers tal-proteini rikombinanti ta 'purità għolja huma ideali għall-użu bħala standards ta' piż molekulari f'applikazzjonijiet SDS-PAGE u Western blot.
3 Huma għandhom affinità għolja għall-membrana, li jiżguraw kulur stabbli tal-medda u riżultati affidabbli.
